實驗準備
培養基配制:
準備不同類型的培養基,如伊紅美蘭瓊脂培養基、營養瓊脂培養基、乳糖膽鹽液體培養基等。
按照配方準確稱量培養基成分,溶解于蒸餾水中。
將配制好的培養基分裝到適當的容器中,如試管、培養皿等。
滅菌:
使用高壓蒸汽滅菌器對培養基進行高壓蒸汽滅菌,通常在121°C、15 psi(約1.05 kg/cm²)的條件下滅菌15至20分鐘。
對實驗器材,如培養皿、移液管、試管等,進行干熱滅菌,通常在160°C至180°C的條件下滅菌2小時。
采樣與培養
采樣:
從肉制品中取適量樣本,通常為25克。
將樣本加入到含有225毫升已滅菌的乳糖膽鹽液體培養基的試管中。
培養:
將接種后的試管放入生化培養箱中,設置適當的溫度(通常為36°C±1°C)。
培養時間通常為18至24小時。
觀察產氣情況與稀釋
觀察產氣:
培養結束后,觀察試管中的產氣情況,記錄陽性管數。
系列稀釋:
對樣本進行系列稀釋,以便于后續的微生物分離。常用的稀釋液包括生理鹽水、磷酸鹽緩沖液等。
劃線與涂布
平板劃線法:
使用無菌接種環,在已滅菌的瓊脂培養基表面劃線,通過劃線來稀釋和分離微生物。
涂布平板法:
將系列稀釋后的樣本涂布在瓊脂培養基表面,使用無菌涂布器均勻涂布。
鑒定
菌落觀察:
觀察培養基上的菌落特征,如大小、形狀、顏色、光澤等。
革蘭氏染色與鏡檢:
對疑似菌落進行革蘭氏染色,并在顯微鏡下觀察其形態和染色特性,以鑒定是否為特定菌種(如大腸菌群)。
菌種保藏
將分離純化后的菌種轉移到適當的保藏介質中,如瓊脂斜面、甘油管等,并存放在低溫(如-80°C)冰箱中,以備后續使用。
這些步驟為一般的肉制品菌群測定流程,具體操作時可能需要根據實驗目的、所使用的培養基和儀器設備等因素進行調整
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