喆圖小編以紫外線處理產蛋白酶的海洋細菌,通過透明圈法初篩,選擇蛋白酶活力高的菌株。
實驗材料及設備
產蛋白酶菌株、超凈工作臺、電磁力攪拌器、低速離心機、培養皿、涂布器、10mL 離心管、吸管、250mL三角瓶、恒溫搖床、液晶顯示生化培養箱、直尺、棉簽、橡皮手套。
培養基和試劑
1) 無菌生理鹽水、75%酒精
2) 篩選培養基:脫脂奶粉培養基
3) 海水2216E 液體培養基
實驗步驟
1. 出發菌株移接新鮮斜面培養基,于28℃液晶顯示生化培養箱恒溫培養24h;
2. 將活化后的菌株接種于液體2216E 培養基,于28℃ 恒溫培養搖床150rpm 振蕩培養12h;
3. 取1ml培養液于5ml離心管中,10000rpm 離心5min,棄去上清液,加1ml無菌生理鹽水,重新懸浮菌體,再離心,棄去上清,重復上述 步驟用1ml生理鹽水恢復成菌懸液;
4. 將1ml上述菌懸液倒入無菌空平板中,再加入10ml無菌生理鹽水,磁力攪拌1min。
5. 將紫外燈打開,預熱30min;
6.打開無菌平板蓋,紫外照射處理60s,照射完畢后先蓋上平板蓋,再關閉攪拌和紫外燈;
7.取處理過的菌懸液0.1ml涂布1個篩選平板;
8.將誘變菌液在液晶顯示生化培養箱28℃黑暗中培養過夜,然后在紅燈下稀釋涂菌進行初篩(避光培養),觀察在菌落周圍出現的透明圈大小。
以上內容僅供參考,如需了解詳情請聯系喆圖客服!
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